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10×酸性蛋白Native PAGE轉(zhuǎn)膜緩沖液

10×酸性蛋白Native PAGE轉(zhuǎn)膜緩沖液

產(chǎn)品編號:AP5015

產(chǎn)品規(guī)格:1升

數(shù)量
價格 ¥150


10×酸性蛋白Native PAGE轉(zhuǎn)膜緩沖液

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

AP5015

10×酸性蛋白Native PAGE轉(zhuǎn)膜緩沖液(粉末)

1

簡介:

10×酸性蛋白Native PAGE轉(zhuǎn)膜緩沖液適用于酸性蛋白電泳后凝膠上非變性酸性蛋白的轉(zhuǎn)膜。本轉(zhuǎn)膜液配制便捷,稀釋后無需調(diào)節(jié)pH值,pH約為9.2。緩沖液主要成分為Tris,甘氨酸和微量SDS。該緩沖液最終可配成10升即用型1×緩沖液(要補(bǔ)加甲醇)。

保存條件:

粉末裝常溫保存,兩年有效。

配制方法:

10×轉(zhuǎn)膜緩沖液粉末全部溶解于1升超純水中,徹底溶解,即配成10×轉(zhuǎn)膜緩沖液。根據(jù)下表配制成1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液

 

1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液

 

500 ml

1 L

10×轉(zhuǎn)膜緩沖液

50 ml

100 ml

超純水

400 ml

800 ml

無水甲醇

50 ml

100 ml

 

不用調(diào)節(jié)pH

使用方法:

1. 酸性蛋白非變性電泳:

各種蛋白質(zhì)分子由于所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數(shù)目不同,因而有各自的等電點(diǎn)。凡堿性氨基酸含量較多的蛋白質(zhì)稱為堿性蛋白,等電點(diǎn)偏堿性,pI>7,如組蛋白、精蛋白等。反之,凡酸性氨基酸含量較多的蛋白質(zhì),等電點(diǎn)就偏酸性,pI<7,自然界中大多數(shù)蛋白都是酸性蛋白。分離堿性蛋白時候,要利用低 pH 凝膠系統(tǒng),分離酸性蛋白時候,要利用高 pH 凝膠系統(tǒng)。酸性蛋白通常在非變性凝膠電泳中采用的 pH 是 8.8的緩沖系統(tǒng),蛋白會帶負(fù)電荷,蛋白會相陽極移動;而堿性蛋白通常電泳是在微酸性環(huán)境下進(jìn)行,蛋白帶正電荷,這時候需要將陰極和陽極倒置才可以電泳。酸性蛋白電泳可參考使用非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒(貨號:RTD6130)。

2. 轉(zhuǎn)膜:

  轉(zhuǎn)膜方法:酸性蛋白在非變性狀態(tài)的轉(zhuǎn)膜建議用濕轉(zhuǎn)法。

  三明治結(jié)構(gòu):由于酸性蛋白pI<7 在堿性轉(zhuǎn)膜緩沖液中帶負(fù)電荷,轉(zhuǎn)膜三明治結(jié)構(gòu)與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)膜相同,即根據(jù)“黑膠白膜”制作三明治,即膜置于轉(zhuǎn)膜夾芯正極一側(cè),凝膠置于轉(zhuǎn)膜夾芯負(fù)極一側(cè),這樣凝膠上帶負(fù)電荷的酸性蛋白才能轉(zhuǎn)移到膜上。

酸性蛋白轉(zhuǎn)膜三明治制作:

負(fù)極(電轉(zhuǎn)夾黑色面)-海綿墊-35層濾紙-凝膠--35層濾紙-海綿墊-正極(電轉(zhuǎn)夾白色面)

  膜的選擇:膜可以用PVDF膜或NC膜,根據(jù)蛋白大小選擇膜的孔徑。一般說來,大于20kD蛋白選擇0.45μm孔徑,低于20kD選擇0.22μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化,NC膜只需用轉(zhuǎn)膜緩沖液潤濕就可以。

轉(zhuǎn)膜條件:

由于在非變性條件下,不同酸性蛋白的空間結(jié)構(gòu),聚合狀態(tài),電荷數(shù)量都有不同,以下轉(zhuǎn)膜條件僅供參考,客戶針對自己的目的蛋白,最好經(jīng)過1-2次預(yù)實(shí)驗(yàn)后,確定最佳的轉(zhuǎn)膜條件。

蛋白大小

穩(wěn)流

建議時間

降溫措施

低于70kD

180 mA

2 小時

需要

高于70kD

300 mA

1.5 小時

需要




 
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