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10×CAPS轉(zhuǎn)膜緩沖液

10×CAPS轉(zhuǎn)膜緩沖液

產(chǎn)品編號:CP5015

產(chǎn)品規(guī)格:500ml

數(shù)量
價格 ¥300

10×CAPS轉(zhuǎn)膜緩沖液

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

CP5015

10×CAPS轉(zhuǎn)膜緩沖液

500 ml

簡介:

10×CAPS轉(zhuǎn)膜緩沖液(10×CAPS Transfer Buffer)適用于蛋白電泳后凝膠上蛋白的轉(zhuǎn)膜,主要成分為CAPS[3-(環(huán)己氨基)-1-丙磺酸]。本轉(zhuǎn)膜液配制便捷,稀釋后無需調(diào)節(jié)pH值,pH約為11.0。由于緩沖液具有較高的pH,特別適合于堿性蛋白非變性電泳后的轉(zhuǎn)膜實驗。另外,由于緩沖液中不含有甘氨酸,轉(zhuǎn)膜后的蛋白可以進(jìn)行N端測序。

該緩沖液最終可配成至少5升即用型1×緩沖液(根據(jù)需求補加甲醇)。

保存和運輸:

4℃保存,常溫運輸,一年有效;配成1×含甲醇溶液后4℃貯存,1個月有效。

配制方法:

10×轉(zhuǎn)膜緩沖液稀釋10倍,根據(jù)實驗需求加或不加甲醇,即配成1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液。

 

1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液

 

500 ml

1 L

2 L

10×轉(zhuǎn)膜緩沖液

50 ml

100 ml

200 ml

超純水

350 ml

700 ml

1400 ml

無水甲醇

50 ml

100 ml

200 ml

 

不用調(diào)節(jié)pH

注:非變性蛋白電泳轉(zhuǎn)膜不加或少加甲醇;變性蛋白電泳轉(zhuǎn)膜可以加終濃度低于10%甲醇。

使用方法:

1. 轉(zhuǎn)膜方法:使用CAPS轉(zhuǎn)膜緩沖液,電泳后的轉(zhuǎn)膜建議用濕轉(zhuǎn)法。

2. 膜的選擇:轉(zhuǎn)膜可以使用PVDF膜和NC膜。根據(jù)蛋白大小選擇膜的孔徑。一般說來,大于20 kD蛋白選擇0.45 μm孔徑,低于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化。

3. 三明治結(jié)構(gòu):轉(zhuǎn)膜三明治結(jié)構(gòu)與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)膜相同,即根據(jù)“黑膠白膜”制作三明治,即膜置于轉(zhuǎn)膜夾芯正極一側(cè),凝膠置于轉(zhuǎn)膜夾芯負(fù)極一側(cè),這樣凝膠上帶負(fù)電荷的蛋白才能轉(zhuǎn)移到膜上。

蛋白轉(zhuǎn)膜三明治制作:

負(fù)極(電轉(zhuǎn)夾黑色面)-海綿墊-11 mm厚度濾紙-凝膠--11 mm厚度濾紙-海綿墊-正極(電轉(zhuǎn)夾白色面)

4. 轉(zhuǎn)膜條件:

以下轉(zhuǎn)膜條件僅供參考,客戶針對自己的目的蛋白大小,最好經(jīng)過1-2次預(yù)實驗后,確定最佳的轉(zhuǎn)膜條件。

蛋白大小

穩(wěn)流

建議時間

降溫措施

低于70kD

150 mA

1 小時

不需要

70-300 kD

200 mA

1.5-2 小時

需要

高于300 kD

200 mA

2.5-3.5 小時

需要

5. 進(jìn)行后續(xù)WB操作:封閉-一抗-二抗-檢測。


 
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